Окраска срезов/культур антителами

День 1 Gaba кролик 1:1000 GAD(1:500) мышиный Parv CELLSignal 1:500 кролик NeuN (1:500) мышь GFAP 1:500 мышь Кисточкой переносим срезы в PBS Triton 0,3% 30мин 50rpm. 3 отмывки PBS по 5 минут, затем PBS Tween 0,1% NGS 5% 300 мкл 1 ч на комнатной температуре Первичные антитела в PBS Tween 0,1% NGS 5%. На ночь на качалку в холодильник. День 2 3 по 5 минут отмывки PBS Tween 0,1% и сразу вторичные антитела 1:1000 25°C 2 ч в NGS 2 раза отмываем PBS Tween 0,1% по 500 мкл по 5 мин 1 раз PBS 500 мкл 5 мин PBS DAPI 1:1000 300мкл - 10 мин заменяем на PBS помещаем стекла/срезы на предметное стекло Для срезов: Разморозить Mowiol Окунуть покровное стекло в 96% спирт, промыть и положить сушиться налить в чашку Петри 10 см PBS переместить срез кисточкой в PBS наклоняя предметное стекло, переместить срез кисточной на стекло Дать срезу высохнуть. Если срез пересыхает, смочить кисточкой PBS Налить 180-200 мкл Mowiol на покровное стекло аккуратно положить покровное стекло на предметное со срезами оставить на сутки в горизонтальном положении, затем можно переставить в коробку Для культур: на предметное стекло нанести 5 мкл Mowiol окрашенное стекло подсушить вертикально о салфетку c помощью пинцета положить окрашенное стекло на предметное стекло на Mowiol оставить предметное стекло на сутки в горизонтальном положении, затем можно перенести в коробку