Трансформация бактерий лигазной смесью

Вытащить чашку с антибиотиком сушиться в инкубатор, приоткрыв крышку на 1 час (по окончании этого времени закрыть крышку и вытащить чашку в комнатную температуру) Поставить размораживаться 400 мкл LB на комнатной температуре ( или налить из банки) Приготовить лёд, перенести в лед пробирку со 100 мкл компетентных клеток (TOP10 или других) Оставить во льду на 15-20 минут Включить термостаты на 42 и 37 градусов Когда клетки разморозятся, добавить до 10 мкл холодной лигазной смеси клеткам. Сразу в лед. Вытащить, перемешать постукиванием по пробирке и сразу в лед. Оставить на 20 минут во льду. Провести тепловой шок - 45 секунд при температуре 42 градуса и 45 секунд во льду Добавить бактериям с лигазной смесью 400 мкл LB, перемешать и поместить на 37 градусов на 1 час Подписать чашки Петри на стороне агара Центрифугировать 3 минуты 3 тыс об на центрифуге Minispin Далее в присутствии огня. Слить супернатант (на дне останется 50-100 мкл LB) Перемешать осадок в оставшейся жидкости пипеткой и перенести на чашку с антибиотиком Над огнем простерилизовать стеклянный шпатель, остудить и растереть жидкость с бактериями Убрать чашку Петри в инкубатор агаром кверху На следующий день замотать чашку Петри парафильмом и убрать в холодильник. Если трансформация в пятницу - оставить чашку в комнатной температуре на столе до понедельника. Внимание - некоторые бактерии инкубируют при более низкой температуре, уточняйте!!!